碧云天生产的QuickMutation™基因随机突变试剂盒(QuickMutation™ Random Mutagenesis Kit)是一种基于易错PCR(Error Prone PCR)的方法使目的基因片段通过PCR扩增后发生一定几率的随机突变的试剂盒。
基因的随机突变是研究蛋白结构与功能的关系、以及抑制或者改良甚至创造蛋白或酶活性的重要方法。
易错PCR方法通常是指通过易错耐热DNA聚合酶进行PCR扩增，从而在目的基因序列中引入随机突变的方法。易错PCR方法在目的基因序列中引入随机突变后，最终很可能在蛋白水平上产生氨基酸序列的突变，从而可以随机产生活性更强、更弱甚至失去活性的蛋白或酶，也有可能使蛋白或酶产生新的活性。
为了分析蛋白结构和功能的关系，理想的突变应该是每个蛋白发生1个氨基酸改变(1-2核苷酸突变)；在蛋白进化研究方面，理想的突变是每个蛋白发生1-4个氨基酸改变(约2-7核苷酸突变)；从突变文库中筛选高活性的蛋白或者酶则通常希望每个基因产生20个左右的核苷酸突变。
本试剂盒提供的RandomMut DNA polymerase，是一种全新的专门用于易错PCR的DNA聚合酶，在配套的反应缓冲液中加入推荐量的Mutation enhancer情况下，可以在每kb的基因中引入约7.8个随机突变，而且这些突变是AT→GC和GC→AT两个方向的突变基本均衡的，(AT→GC mutations) / (GC→AT mutations) = 1.06，同时还会引入适量的插入(insertion)和缺失(deletion)突变。
本试剂盒扩增出来的DNA片段为黏性末端，可以直接用于常规的T载体克隆。
本试剂盒可扩增长达6kb的目的片段。
用户可以自行调整本试剂盒的突变几率，使用更加便捷。本试剂盒提供了Mutation enhancer (10X)，通过改变Mutation enhancer的用量可以显著影响突变率(参见表1)。
表1. 利用QuickMutation™基因随机突变试剂盒使用不同浓度的Mutation enhancer PCR扩增1000bp片段后双酶切插入空载体，然后随机挑选若干克隆进行测序分析的结果。PCR扩增的1000bp模板片段插入在约4kb的质粒中，测试时1000bp模板的用量是120pg/µl，相当于模板质粒的用量为600pg/µl，PCR循环数为30。
| 0.5X Mutation enhancer | 1X Mutation enhancer | 2X Mutation enhancer | ||||
| Total mutations found | 63 | 98 | 134 | |||
| Mutations | Mutations | Percentage | Mutations | Percentage | Mutations | Percentage |
| A→T | 8 | 12.7% | 10 | 10.2% | 21 | 15.7% |
| A→G | 10 | 15.9% | 13 | 13.3% | 21 | 15.7% |
| A→C | 1 | 1.6% | 2 | 2.0% | 4 | 3.0% |
| T→A | 7 | 11.1% | 10 | 10.2% | 15 | 11.2% |
| T→G | 1 | 1.6% | 4 | 4.1% | 2 | 1.5% |
| T→C | 8 | 12.7% | 15 | 15.3% | 17 | 12.7% |
| G→A | 11 | 17.5% | 13 | 13.3% | 10 | 7.5% |
| G→T | 1 | 1.6% | 6 | 6.1% | 6 | 4.5% |
| G→C | 2 | 3.2% | 4 | 4.1% | 8 | 6.0% |
| C→A | 2 | 3.2% | 3 | 3.1% | 8 | 6.0% |
| C→T | 5 | 7.9% | 10 | 10.2% | 13 | 9.7% |
| C→G | 3 | 4.8% | 3 | 3.1% | 4 | 3.0% |
| Insertions | 1 | 1.6% | 1 | 1.0% | 0 | 0.0% |
| Deletions | 3 | 4.8% | 4 | 4.1% | 5 | 3.7% |
| Bias Indicators (AT→GC/GC→AT) | ||||||
| (AT→GC) / (GC→AT) | 1.05 | 1.06 | 1.19 | |||
| A→N, T→N | 19+16=35 | 55.6% | 25+29=54 | 55.1% | 46+34=80 | 59.7% |
| G→N, C→N | 14+10=24 | 38.1% | 23+16=39 | 39.8% | 24+25=49 | 36.6% |
| Transitions | ||||||
| A→G, T→C | 18 | 28.6% | 28 | 28.6% | 38 | 28.4% |
| G→A, C→T | 16 | 25.4% | 23 | 23.5% | 23 | 17.2% |
| Transversions | ||||||
| A→T, T→A | 15 | 23.8% | 20 | 20.4% | 36 | 26.9% |
| A→C, T→G | 2 | 3.2% | 6 | 6.1% | 6 | 4.5% |
| G→C, C→G | 5 | 7.9% | 7 | 7.1% | 12 | 9.0% |
| G→T, C→A | 3 | 4.8% | 9 | 9.2% | 14 | 10.4% |
| Insertions and Deletions | ||||||
| Insertions | 1 | 1.6% | 1 | 1.0% | 0 | 0.0% |
| Deletions | 3 | 4.8% | 4 | 4.1% | 5 | 3.7% |
| Mutation Frequency | ||||||
| Mutations/kb (per PCR) | 5.5 | 7.8 | 10.7 | |||
| 突变碱基数范围 | 0-11 | 3-12 | 4-18 | |||
本试剂盒如果用于20µl的PCR突变体系，两种包装的本试剂盒分别可以进行50次和200次基因随机突变，如果用于50µl的PCR突变体系，两种包装的本试剂盒分别可以进行20次和80次基因随机突变。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D0219S-1 | RandomMut DNA polymerase | 20µl |
| D0219S-2 | RandomMut buffer (10X) | 150µl |
| D0219S-3 | Mutation enhancer (10X) | 150µl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：PCR反应非常灵敏，在使用RandomMut DNA polymerase进行PCR扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量设置不加模板的空白对照。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
沪公网安备31011502019119号